什么是文庫(kù)構(gòu)建？

基于NGS測(cè)序的諸多優(yōu)點(diǎn)，故此技術(shù)在全球測(cè)序市場(chǎng)上占有著絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)位置，而新一代測(cè)序（NGS）文庫(kù)制備是一體化測(cè)序流程中的一個(gè)關(guān)鍵因素，那么什么是文庫(kù)構(gòu)建呢？讓我們一起來看看吧！

基因文庫(kù)是儲(chǔ)存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫(kù)分為儲(chǔ)存全部DNA片段和部分DNA片段，前者叫基因組文庫(kù)，后者包括cDNA文庫(kù)。

文庫(kù)構(gòu)建的基礎(chǔ)是將目標(biāo)RNA或DNA制備成可以和測(cè)序儀器兼容的形式。從組織或者細(xì)胞中將DNA或RNA提取出來，并通過機(jī)械破碎或者是酶切法對(duì)其進(jìn)行片段化。如果前面提取的是RNA樣本，則需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。對(duì)DNA進(jìn)行接頭的連接后，一般還會(huì)有一個(gè)文庫(kù)的擴(kuò)增，即通過PCR來對(duì)所需的目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，然后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。

傳統(tǒng)的DNA文庫(kù)構(gòu)建包括：DNA片段化（超聲法）、末端修復(fù)、加A、接頭連接和PCR文庫(kù)擴(kuò)增等過程（Figure 1）。整個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA起始量、儀器有一定的要求。

新型的文庫(kù)構(gòu)建方法利用轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)座原理，對(duì)DNA進(jìn)行片段化并同時(shí)加上部分接頭序列，是建庫(kù)過程中是一個(gè)重大的進(jìn)步。

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