如何處理PCR反應中的污染？

PCR反應的特點是具有較大擴增能力與靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。那么我們該如何處理PCR反應中的污染呢？讓我們一起來看看吧！一、環境污染1.稀酸處理法：對可疑器具用1mol/L鹽酸擦拭或浸泡，使殘余DNA脫嘌呤。2.紫外照射（UV）法：紫外波長（nm）一般選擇254/300nm,照射30min即可。需要注意的是，選擇UV作為消除殘留PCR產物污染時，要考慮PCR產物的長度與產物序列中堿基的分布，UV照射僅對500bp以上長片段有效，對...

查看更多

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區有哪些？

磁珠法核酸提取是傳統DNA提取方法wu法比擬的，那么在磁珠法核酸提取過程中的常見誤區有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、磁珠越多，提取效果越好磁珠的主要特點是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場作用下以固態方式和液相分li任何試劑體系，磁珠和液體的比例都應該是有一定閾值的，超過一定的比例，過多的磁珠將因為無法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過程中無法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過量的磁珠也會吸附更多的雜質，對于除雜的效果影響非常大。甚至有些時候，過多的磁...

查看更多

蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么？

在進行任何一種蛋白質純化的時候，都要時刻注意維護它的穩定性，保護它的活性，那么你知道蛋白質提純的注意事項和常見問題有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、注意事項：1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫內進行。2、濃度不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。3、選擇合適的pH，除非是進行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質的沉淀。4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質時，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對蛋白的污染。5、避免...

查看更多

你知道WB實驗操作步驟有哪幾步嗎？

蛋白質印跡(Westernblotting)：又稱為免疫印跡，根據抗原抗體的特異性結合，半定量檢測樣品中的某種蛋白的方法?；驹硎峭ㄟ^特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析條帶的位置和條帶深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況。那么你知道WB實驗操作步驟有哪幾步嗎？讓我們一起來看看吧！一、樣本制備蛋白提取1.前期準備：首先要了解你所研究蛋白的內源表達水平，常用的數據庫如Uniport、Atlas、BioGPS，或查閱相關文獻。設置陽性對照...

查看更多

細胞培養基的滅菌及儲存方法有哪些？

不同的培養基由于其營養成份不同，滅菌方式和儲存方法也可能不同。那么細胞培養基的滅菌及儲存方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、不同細胞培養基的除菌方式及注意事項某些培養基（如MEM）可進行高壓滅菌，這類培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺。可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi，15分鐘的條件下wan全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。絕大多數細胞...

查看更多