DNA的濃度和純度檢測(cè)方法

目前常用紫外分光光度法檢測(cè)核酸的濃度及純度。

一、檢測(cè)原理

紫外分光光度法基于DNA鏈上堿基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)在紫光區(qū)具有較強(qiáng)吸收，DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質(zhì)在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長(zhǎng)進(jìn)行分光測(cè)定核酸濃度，OD值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA，單鏈DNA濃度約為33ug/ml，RNA約為40ug/ml，寡核苷酸約為35ug/ml。如用H，O稀釋DNA/RNA樣品n倍并以H，O為空白對(duì)照，根據(jù)此時(shí)讀出的OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度

二、DNA純度比值

DNA 純度比值是表示DNA樣本中 DNA 的相對(duì)濃度的指標(biāo)，它是通過測(cè)量樣本中不同物質(zhì)的含量來計(jì)算的。A280nm是蛋白和酚類物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族)或分類物質(zhì)的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當(dāng)于50%蛋白質(zhì)/DNA溶液。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，純DNA和RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標(biāo)明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機(jī)溶劑污染，需要純化樣品。

三、DNA純度比值可能受到以下因素的影響

1. 樣本收集和存儲(chǔ)方法：樣本在收集和存儲(chǔ)過程中可能會(huì)受到污染，影響DNA純度。

2. DNA 提取方法：不同的DNA提取方法可能導(dǎo)致DNA純度的不同。

3. 生物樣本的特性：不同的生物樣本中的DNA含量和組成也可能導(dǎo)致DNA純度的不同。

4. 純化步驟：在純化DNA時(shí)，不同的純化方法和操作步驟可能對(duì)DNA純度產(chǎn)生影響。

5. 測(cè)量方法：不同的測(cè)量方法可能產(chǎn)生不同的DNA純度比值。

因此，為了確保DNA純度的準(zhǔn)確性，需要在每個(gè)步驟中注意控制可能影響DNA純度的因素，并使用適當(dāng)?shù)姆椒ê图夹g(shù)進(jìn)行測(cè)量。

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