DNA的濃度和純度檢測方法

目前常用紫外分光光度法檢測核酸的濃度及純度。

一、檢測原理

紫外分光光度法基于DNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長進行分光測定核酸濃度，OD值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA，單鏈DNA濃度約為33ug/ml，RNA約為40ug/ml，寡核苷酸約為35ug/ml。如用H，O稀釋DNA/RNA樣品n倍并以H，O為空白對照，根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度

二、DNA純度比值

DNA 純度比值是表示DNA樣本中 DNA 的相對濃度的指標，它是通過測量樣本中不同物質的含量來計算的。A280nm是蛋白和酚類物質最高吸收峰的吸收波長，純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族)或分類物質的污染，需要純化樣品。比值=1.5相當于50%蛋白質/DNA溶液。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，純DNA和RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小于2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染，需要純化樣品。

三、DNA純度比值可能受到以下因素的影響

1. 樣本收集和存儲方法：樣本在收集和存儲過程中可能會受到污染，影響DNA純度。

2. DNA 提取方法：不同的DNA提取方法可能導致DNA純度的不同。

3. 生物樣本的特性：不同的生物樣本中的DNA含量和組成也可能導致DNA純度的不同。

4. 純化步驟：在純化DNA時，不同的純化方法和操作步驟可能對DNA純度產生影響。

5. 測量方法：不同的測量方法可能產生不同的DNA純度比值。

因此，為了確保DNA純度的準確性，需要在每個步驟中注意控制可能影響DNA純度的因素，并使用適當的方法和技術進行測量。

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