ELISA主要材料試劑有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢？讓我們一起來看看吧！

一、抗原和抗體

在ELISA實施過程中，抗原和抗體的質量決定實驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。ELISA 所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化，提取出特定的抗原成分后才可應用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。

重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術難度且要求較為昂貴的儀器設備和試劑，但對那些不易得到的天然抗原，顯出其du特的優(yōu)勢。

二、Elisa板

可用作ELISA板的物質很多，常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯，它們具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。作為塑料，可制成各種形式。在ELISA測定過程中，它們作為載體和容器，不參與化學反應。加之它們的價格低廉，所以被普遍采用。專用于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板，國際通用的標準板形是8×12的96孔式。

三、酶和底物

ELISA實驗中對所使用的酶也有所要求，主要為純度高、催化反應的轉化率高、專一性強、性質穩(wěn)定、來源豐富、價格便宜、制備成的酶標抗體或抗原性質穩(wěn)定，與抗體或抗原偶聯(lián)后需繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在與標記酶相同的酶。此外，酶的底物應易于制備和保存，價格低廉，有色產(chǎn)物易于測定，光吸收度高。ELISA中常用的酶為辣根過氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶（AP）。

四、免疫吸附劑

固相的抗原或抗體稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯 ELISA 板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（常用的為 pH9.6 的碳酸鹽緩沖液）中，加至ELISA 板孔中在 4℃ 過夜孵育，經(jīng)清洗后即可使用。如果包被液中的蛋白質濃度過低，固相載體表面未能被此蛋白質wan全覆蓋，其后加入的待測樣品中的蛋白也會吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色而導致本底偏高。

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