如何提高DNA純度測定的準確性？

分子生物學實驗中經(jīng)常需要對樣本進行濃度和純度的測定，它相當于一種質(zhì)控，以此來確保下游實驗的結(jié)果可靠。那么該如何提高DNA純度測定的準確性呢？讓我們一起來看看吧！

常用的DNA濃度/純度測定設備是紫外分光光度計，它的原理是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進行分析物質(zhì)成分。假設現(xiàn)在有一樣物質(zhì)A，它溶解在溶液內(nèi)，當光照射溶液時，溶液內(nèi)的A會吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長，A對不同顏色的光（不同波長）的吸收程度是不一樣的。

雙鏈的DNA，它能對波長為260nm的光進行強烈的吸收，吸收的程度可以用一個叫吸光度的數(shù)值來測量，濃度越高的DNA，理論上吸光度也越高。

最后，通過與標準品的吸光度數(shù)值對比后，就可以知道未知濃度的DNA有多少量了。

DNA濃度測定通常會使用紫外分光光度計，常見的有NanoDrop這類設備。除了DNA，它還能測定RNA和蛋白的吸光度。

要提高濃度測定的準確性，需要注意以下幾點：

1. 檢測之前，務必充分混勻DNA溶液，因為這類機器的上樣檢測體積只需要1-2uL，如果樣品沒有混勻，那么每次檢測樣品濃度也會不一樣。

2. 因為上樣體積很小，所以樣品很容易揮發(fā)，如果把樣品加在檢測基座后不馬上檢測的話，會導致測出來的樣品濃度偏高。

3. 實驗環(huán)境和耗材的穩(wěn)定性要高。檢測設備應該在放置在溫度可控、通風的環(huán)境下；裝樣品的管子如果不是要進行吸取樣品操作的話，需要時刻緊閉。

4. 每次檢測完畢，都需要對檢測基座或者比色皿進行清洗和擦拭，確保不會有樣品殘留后，再進行下一次上樣檢測。

5. 空白調(diào)零，應該使用溶解待檢測樣品的溶液來調(diào)零。例如如果用水溶解DNA，那就用水調(diào)零，用其他緩沖液溶解，則用對應的緩沖液調(diào)零。

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