親和層析介質純干貨分享

  親和層析（Affinity chromatography）是一種根據生物分子與其他配基分子之間特異性結合的原理來分離物質的層析方法。通過配基與目標分子之間的可逆結合來實現純化目標分子的目的。親和層析具有高選擇性，而且能有效地保持生物大分子高級結構的穩定性，同時還具有對活性樣品高回收率的特點，是當前最為理想的分離純化蛋白的方法。

親和層析原理

常用的生物親和關系有：

親和層析介質是在交聯瓊脂糖上連接不同親和配基構成的介質，由基質、配基和間隔臂三個部分組成。親和層析介質按配基不同又可分為多種類型，比如Protein A和Protein G親和層析介質，GST親和層析介質，IMAC（金屬螯合介質）親和層析，Heparin（肝素）親和層析介質等。

親和層析介質結構

對于IgG的純化，大部分情況下會選擇使用Protein A或Protein G進行親和層析。因為它們對于IgG的Fc段具有特異性的親和作用。

其中Protein A是從金黃色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質，可特異性與人或哺乳動物抗體（主要是IgG）的Fc區域結合，主要結合亞類為IgG1、IgG2和IgG4。分為天然Protein A和重組Protein A。重組Protein A更耐堿性，且耐受蛋白酶。

Protein G是從G類鏈球菌中分離出來的胞壁蛋白。相對于Protein A，Protein G對于大多數哺乳動物的IgG有著更高的親和力，尤其是對于IgG的亞基，如人IgG3，小鼠IgG1和IgG2a。因此，Protein G可用于純化不能與Protein A很好結合的哺乳動物單抗和多抗IgG。

   GST親和層析介質是一種用于快速純化谷胱甘肽s -轉移酶(GST)標記蛋白、其他谷胱甘肽轉移酶以及與谷胱甘肽有親和作用的蛋白質的分離介質，可以快速純化細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞培養物中表達的GST標記蛋白。

IMAC親和層析介質是基于某些過渡金屬離子（主要是Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺）與含有組氨酸（或半胱氨酸和色氨酸）的暴露氨基酸表面鏈之間的特定相互作用。IMAC用于純化在細菌、酵母和哺乳動物細胞中表達的帶組氨酸標簽的重組蛋白，還可用于純化某些天然的非標記蛋白質，例如干擾素、凝集素、抗體、血清和血漿蛋白、肽和肽激素。

Heparin親和層析介質用于純化對肝素有親和力的生物分子，如抗凝血酶III、凝血因子和其他血漿蛋白、DNA 結合蛋白、脂蛋白、蛋白質合成因子、作用于核酸的酶和類固醇受體等。

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