抗體制備方法

 

　　制備出效價高，特異性強，穩定性好的抗體是免疫學實驗取得成功的基礎，抗體質量的好壞直接影響著研究者研究的成敗，不同的免疫學實驗方法（如ELISA，IHC，IP，ICC,SDS-PAGE,WB等）對抗體的效價，濃度和純度有不同的要求。我們知道，一般免疫血清中含有特異性抗體和非特異性抗體，血清蛋白以及其他各種雜蛋白等，在制備特異性抗體過程中當抗體的效價達到實驗預期之后，我們所制備的抗體的純度關鍵取決于所選擇的純化方法。下面就一一介紹常用抗體純化方法及其相關原理。

 

　　沉淀法

 

　　硫酸銨/辛酸沉淀法是純化抗體傳統的方法之一，被廣泛用于血清和腹水抗體的濃縮和粗純，此方法可大規模粗純抗體，但純化后純度不高，還需配合其它方法繼續純化。通常是將飽和硫酸加入血清或腹水中，將抗體沉淀下來，然后在溶解沉淀繼續下一步的純化。辛酸沉淀抗體通常要先將腹水或血清的pH調4.8，然后緩慢的滴加辛酸，是蛋白沉淀，抗體在上清中，上清繼續下一步的純化。

 

　　離子交換層析

 

　　離子交換層析也常用于抗體的純化，通量大，工業上用離子交換層析成本低，主要用于除去非抗體蛋白，及用親和層析純化時混入的Protein A/G等親和填料脫離的配基，內毒素的去除等。離子交換純化時，根據抗體的pI選擇合適的離子交換類型，在pI未知時可以分別用陰陽離子交換填料去試驗。